常温细胞收货当天处理方式

1.收到常温细胞后，及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。

2.镜下观察有无微生物污染现象，拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现 象,方便后续售后处理。

3.用75%酒精擦拭瓶身，置于培养箱中静置培养 2~4h 后进行传代操作。

4.观察细胞密度若超过80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代，请根据实 际情况决定)， 传代推荐比例1：2到1：3(按实际收货细胞密度决定，若不确定可联系技术支持);若细胞密度不到80%则可取出部分培养基留6ml左右原瓶培养 基继续培养，注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖；悬浮细胞注意离心所有培养基以收集细胞。

5. 由于气温，运输等影响造成贴壁细胞漂浮的，请将细胞离心收集后在离心管中 消化后进行传代 ，或及时联系技术支持进行指导传代。

6.若观察到异常或者对细胞有疑问，请及时跟代理商或者我们联系；对于细胞培 养操作及培养注意事项有疑问的，可跟我们的技术支持交流。

附:收到贴壁细胞漂浮处理方法 (部分细胞由于贴壁松散，会出现运输后漂浮，冬天气温低时也会出现细胞收缩漂浮，属于不可避免因素，正确处理后都可以正常生长)

1、将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，离心收集细胞 (1200rpm 3min) 去除 旧培养基；

2、用 PBS 重悬细胞，将所有细胞收集到一个离心管中，再次离心 (1200rpm 3min) 去 除 PBS；

3、加入1ml左右0.25%胰酶重悬细胞，混匀即可，不能吹打太多次，放入培养 箱消化 细胞，根据细胞特性决定消化时间 (TM3、TM4、293 系列约 1~2 分钟)；

4、消化好后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散，迅速加入 3-5ml 含 血清的培 养基混匀以终止消化，离心 (1200rpm 3min) 去除胰酶；

5、加入 5ml 左右的细胞相应的完全培养基混匀，按比例接入无菌培养瓶/皿中；

6、显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单颗细胞，若有 3-5 个成团的小细胞 团可不用 重新消化，使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。

Acknowledgements

Work in the authors’ lab was supported by grants from the NIH (AI139046 to L. V.K.) and the National Multiple Sclerosis Society (60006625 to L.V.K.).

Con?ict of interest

The authors declare that they have no conlict of interest.

Publisher’s note

Springer Nature remains neutral with regard to jurisdictional claims in published maps and institutional afiliations.

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4.    Parekh, V. V.  et  al.  Impaired autophagy,  defective T cell homeostasis, and a wasting syndrome in mice with a T cell-speciic deletion of Vps34. J. Immunol. 190, 5086–5101 (2013).

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