产品名称:SF188人胶质母细胞瘤细胞(附STR鉴定报告)、SF188人胶质母细胞瘤细胞(附STR鉴定报告)、SF188人胶质母细胞瘤细胞(附STR鉴定报告)、SF188人胶质母细胞瘤细胞(附STR鉴定报告)、SF188人胶质母细胞瘤细胞(附STR鉴定报告)
常温细胞收货当天处理方式
1.收到常温细胞后,及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。
2.镜下观察有无微生物污染现象,拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现象,方便后续售后处理。
3.用 75%酒精擦拭瓶身,置于培养箱中静置培养 2~4h 后进行传代操作。
4.观察细胞密度若超过 80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代,请根据实际情况决定),首次传代推荐比例 1:2 到 1:3(按实际收货细胞密度决定,若不确定可联系技术支持);若细胞密度不到 80%则可取出部分培养基留 6ml 左右原瓶培养 基继续培养,注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖;悬浮细胞注意离心所有培养基以收集细胞。
5.由于气温,运输等影响造成贴壁细胞漂浮的,请将细胞离心收集后在离心管中消化后进行传代(参考附件),或及时联系技术支持进行指导传代。
6.若观察到异常或者对细胞有疑问,请及时跟代理商或者我们联系;对于细胞培养操 作及培养注意事项有疑问的,可跟我们的技术支持交流。
附:收到贴壁细胞漂浮处理方法(部分细胞由于贴壁松散,会出现运输后漂浮,冬天气温低时也会出现细胞收缩漂浮,属于不可避免因素,正确处理后都可以正常生长)
1、将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管,离心收集细胞(1200rpm 3min)去除 旧培养基;
2、用 PBS 重悬细胞,将所有细胞收集到一个离心管中,再次离心(1200rpm 3min)去除 PBS;
3、加入 1ml 左右 0.25%胰酶重悬细胞,混匀即可,不能吹打太多次,放入培养箱消化细胞,根据细胞特性决定消化时间(TM3、TM4、293 系列约 1~2 分 钟);
4、消化好后,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散,迅速加入 3-5ml 含 血清的培 养基混匀以终止消化,离心(1200rpm 3min)去除胰酶;
5、加入 5ml 左右的细胞相应的完全培养基混匀,按比例接入无菌培养瓶/皿中;
6、显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单颗细胞,若有 3-5 个成团的小细胞团可不用重新消化,使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。
贴壁细胞传代
1. 从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃;
2. 用不含钙、镁的平衡盐溶液冲洗细胞(每10cm 2培养表面积约2mL溶液);从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液,以避免搅动细胞层,前后摇晃容器数次(注:冲洗步骤可去除可能抑制解离剂作用的少量
血清、钙和镁);
3. 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃,向培养瓶中加入预热的解离剂;试剂量应足以覆盖细胞层(每10cm 2大约0.5mL);
4. 轻轻摇晃容器,使试剂完全覆盖细胞层;吸出多余解离试剂,T25 细胞培养瓶留 200ul 左右即可;
5. 将培养容器在室温下孵育约 2分钟(请注意实际孵育时间根据所用细胞不同而有所差异);
6. 在显微镜下观察细胞解离情况;如果解离程度未达 90%,可将孵育时间 延长几分钟,每 30 秒钟检查一次解离情况;也可轻轻拍打培养容器以加快细胞解离;
7. 细胞解离程度大于等于 90%时,倾斜培养容器,使细胞上液体尽快流尽;加入所用解离剂两倍体积的预热完全生长培养基;吹打细胞层表面数次,使培养基分散;
8. 将细胞转移到15mL 无菌离心管中,以 200×g 的离心力离心 3-5 分钟 (请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异);
9. 用最少体积的预热完全生长培养基重新悬浮细胞沉淀,将细胞悬液按照 推荐比例稀释,并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中,把细胞放回培养箱(注:如果使用培养瓶,将其放入培养箱前应将瓶盖旋松,以便进行充分的气体交换,除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖)。