产品名称:ACC-M人涎腺癌细胞、ACC-M人涎腺癌细胞、ACC-M人涎腺癌细胞、ACC-M人涎腺癌细胞、ACC-M人涎腺癌细胞细胞介绍
ACC-M细胞是ACC-2细胞系经体内外不断选择获得的肺转移细胞株(ACC-2不形成肺转移),其裸鼠体内肺转移率达96%。该细胞株除保留了上皮和腺源性的特性外,体外生长能力大大增强。已证明该细胞株是建立肺高转移性裸鼠模型的极佳材料。
细胞特性
1)?来源:人涎腺癌
2)?形态:上皮细胞样,贴壁生长
3)?含量:>1x106 个/mL
4)?污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)?规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
(1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;
(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
(3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。
细胞用途:
仅供科研使用。
细胞接收后的处理:
1) 收到细胞后,请检查发货培养瓶的状况,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2) 在显微镜下确认细胞生长状态时,最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下,同时给刚收到的细胞拍照,(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3) 观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。
4) 贴壁细胞:在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象,如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长,可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中(或新的培养瓶中)。
5) 悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
6)
备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。??收到细胞后第一次传代建议1:2传代 。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)?
准备RPMI-1640培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)?
培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)?冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.?细胞处理:
1)?复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)?细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.?弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.?加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.?按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4 . 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为类;
1,细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2,4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x10E6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。
3,将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
南京万木春生物科技有限公司(Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向国内外市场专业研发、生产和销售细胞、 外泌体、ELISA 试剂盒、 抗体、重组蛋白及相关试剂。产品在免疫学、信号转导、代谢、 神经科学等领域内都有最前沿科学文献发表,被国内外多所大学、研究机构和药学平台使用并发表文献多达1000多次。我公司凭借优异的产品和完善的服务 体系现已受到广大国内外用户的青睐和认可。
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抗体:兔多抗、鼠单抗种类丰富,一抗 1 万余种,二抗 100 多种;
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常温细胞收货当天处理方式
1.收到常温细胞后,及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。
2.镜下观察有无微生物污染现象,拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现象,方便后续售后处理。
3.用 75%酒精擦拭瓶身,置于培养箱中静置培养 2~4h 后进行传代操作。
4.观察细胞密度若超过 80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代,请根据实际情况决定),首次传代推荐比例 1:2 到 1:3(按实际收货细胞密度决定,若不确定可联系技术支持);若细胞密度不到 80%则可取出部分培养基留 6ml 左右原瓶培养 基继续培养,注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖;悬浮细胞注意离心所有培养基以收集细胞。
5.由于气温,运输等影响造成贴壁细胞漂浮的,请将细胞离心收集后在离心管中消化后进行传代(参考附件),或及时联系技术支持进行指导传代。
6.若观察到异常或者对细胞有疑问,请及时跟代理商或者我们联系;对于细胞培养操 作及培养注意事项有疑问的,可跟我们的技术支持交流。
附:收到贴壁细胞漂浮处理方法(部分细胞由于贴壁松散,会出现运输后漂浮,冬天气温低时也会出现细胞收缩漂浮,属于不可避免因素,正确处理后都可以正常生长)
1、将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管,离心收集细胞(1200rpm 3min)去除 旧培养基;
2、用 PBS 重悬细胞,将所有细胞收集到一个离心管中,再次离心(1200rpm 3min)去除 PBS;
3、加入 1ml 左右 0.25%胰酶重悬细胞,混匀即可,不能吹打太多次,放入培养箱消化细胞,根据细胞特性决定消化时间(TM3、TM4、293 系列约 1~2 分 钟);
4、消化好后,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散,迅速加入 3-5ml 含 血清的培 养基混匀以终止消化,离心(1200rpm 3min)去除胰酶;
5、加入 5ml 左右的细胞相应的完全培养基混匀,按比例接入无菌培养瓶/皿中;
6、显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单颗细胞,若有 3-5 个成团的小细胞团可不用重新消化,使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。
贴壁细胞传代
1. 从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃;
2. 用不含钙、镁的平衡盐溶液冲洗细胞(每10cm 2培养表面积约2mL溶液);从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液,以避免搅动细胞层,前后摇晃容器数次(注:冲洗步骤可去除可能抑制解离剂作用的少量
血清、钙和镁);
3. 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃,向培养瓶中加入预热的解离剂;试剂量应足以覆盖细胞层(每10cm 2大约0.5mL);
4. 轻轻摇晃容器,使试剂完全覆盖细胞层;吸出多余解离试剂,T25 细胞培养瓶留 200ul 左右即可;
5. 将培养容器在室温下孵育约 2分钟(请注意实际孵育时间根据所用细胞不同而有所差异);
6. 在显微镜下观察细胞解离情况;如果解离程度未达 90%,可将孵育时间 延长几分钟,每 30 秒钟检查一次解离情况;也可轻轻拍打培养容器以加快细胞解离;
7. 细胞解离程度大于等于 90%时,倾斜培养容器,使细胞上液体尽快流尽;加入所用解离剂两倍体积的预热完全生长培养基;吹打细胞层表面数次,使培养基分散;
8. 将细胞转移到15mL 无菌离心管中,以 200×g 的离心力离心 3-5 分钟 (请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异);
9. 用最少体积的预热完全生长培养基重新悬浮细胞沉淀,将细胞悬液按照 推荐比例稀释,并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中,把细胞放回培养箱(注:如果使用培养瓶,将其放入培养箱前应将瓶盖旋松,以便进行充分的气体交换,除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖)。
