人可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA试剂盒
- 英文名称:人可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA试剂盒
- 发布日期: 2024-04-13
- 更新日期: 2024-11-12
产品详请
产地 |
进口/国产
|
保存条件 |
2-8℃,避光防潮
|
品牌 |
上海富雨
|
货号 |
WM-YX10046
|
用途 |
仅供科研,不得用于临床
|
检测方法 |
竞争法/夹心法
|
保质期 |
6个月
|
适应物种 |
标题物种
|
检测限 |
可根据客户要求调整
|
数量 |
999
|
英文名称 |
人可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA试剂盒
|
包装规格 |
48T/96T
|
标记物 |
HRP
|
样本 |
血清、血浆、细胞上清液、组织匀浆
|
应用 |
仅供科研,不得用于临床
|
是否进口 |
否
|
人可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA试剂盒
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被颗粒酶B(Gzms-B)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的颗粒酶B(Gzms-B)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
-
酶标仪(450nm)
-
高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
-
37℃恒温箱
操作注意事项
-
试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
-
实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
-
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
-
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
-
所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、1、2、4、8、16 pg/mL
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
-
手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
-
自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤
-
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
-
设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
-
样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
-
除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
-
弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
-
每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
-
每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
-
准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
-
灵敏度:最低检测浓度小于0.1pg/mL。
-
特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
-
重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
-
贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
-
有效期:6个月