BL21(DE3) 感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

本公司生产的 BL21(DE3)感受态细胞是采用大肠杆菌 BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞， 可用于 DNA 的化学转化。使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 107 cfu/μg ，-70℃保存几个月转化效率不发生 改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。

基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

该感受态细胞用于以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7 噬菌体 RNA 聚合酶 基因的表达受控于λ噬菌体 DE3 区的 lacUV5 启动子，该区域整合于 BL21 的染色体上。该菌适合于非毒性蛋 白的表达。

操作步骤（以下操作均按无菌条件的标准进行）：

提示

u 感受态细胞应保存在-70℃ , 不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。

u 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

u 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到 。

1.  取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。 （一次转化感受态细胞的建议用量为 50- 100μl ，可以根据实际情况分装使用。应注意所用 DNA 体积 不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。）以下实验以 100μl 感受态细胞为例。

2.  向感受态细胞悬液中加入目的 DNA ，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。

3.  将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒钟，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2 分钟，该过程不要 摇动离心管。（此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置5-8 分钟左右；如果室温较低，可延长时间至 8- 15 分钟左右。条件允许建议使用 42℃热激方法。）

4.  向每个离心管中加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 150rpm ，摇床 振荡培养 60 分钟， 目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。