T7  表达感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

T7 Express 菌株为大肠杆菌 BL21 增强型菌株，为 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型，主要适用于含有 T7 启动 子的原核表达载体（如 pET 等）的蛋白表达，同样适用于需要大肠杆菌 RNA 聚合酶来转录 RNA 的非 T7 启动 子的表达载体（如 pGEX 等）。该菌株区别于 BL21(DE3)菌株的优势在于 T7 RNA 聚合酶基因整合在细菌染色 体上的 lac 操纵子区域，基因组中无λ前噬菌体序列，并具有抗 T1 噬菌体感染等特点。T7 表达感受态细胞经 特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率大于 108  cfu/μg。

fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr- 73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 (mcrCmrr)114::IS10

菌株抗性：对氨苄青霉素，卡那霉素，壮观霉素，氯霉素，链霉素和四环素敏感。

1.  将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒 DNA 或 5- 10μl 连接产物到细胞中，用手 指拨打管底，轻轻混匀；

2.  冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动；

3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动；

4.  冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动；

5.  加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基；

6.  置于 37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟；

7.  取 50- 100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养 12- 16 小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸 头轻轻吹打散菌块，取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的 液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）

（质粒快速转化步骤：将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟，对于氨苄青霉素抗性的质粒，步骤 4 完成后，可直接涂

布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。）