Shuffle T7-K12  感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

Shuffle T7-K12菌株来源于大肠杆菌K12菌株，适用于T7启动子启动的蛋白表达。细胞内组成型表达的二 硫键异构酶DsbC不仅有利于表达蛋白形成正确的二硫键，并具有分子伴侣的功能，帮助不含二硫键的蛋白正 确折叠。T7 RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域，组成型表达的lac阻遏蛋白能降低基因的背 景表达，有利于毒性蛋白的表达，没有λ前噬菌体序列，具有抗T1噬菌体感染特点。Shuffle T7-K12感受态细胞 经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率大于106 cfu/μg。

F′ lac, pro, lacIq /△(ara-leu) 7697 araD139fhuA2 lacZ::T7 gene1△(phoA) PvuIIphoR ahpC* galE (or U) galK λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq)△trxB rpsL150(StrR)△gor△(malF)3

菌株抗性：对氨苄青霉素，氯霉素，卡那霉素和四环素敏感，对链霉素和壮观霉素有抗性。

1.  将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒 DNA 到细胞中，用手指拨打管底，轻轻

混匀；

2.  冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动；

3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动；

4.  冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动；

5.  加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基；

6.  置于 30℃摇床中，150-200rpm，复苏培养 60 分钟；

7.  取 50- 100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 30℃培养 12-24 小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸 头轻轻吹打散菌块，取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的 液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）

（质粒快速转化步骤：将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟，对于氨苄青霉素抗性的质粒，步骤 4 完成后，可直接涂

布或划线于含抗生素的平板上。其它抗性的质粒仍需 40-60 分钟的复苏培养。）