上海富雨生物科技有限公司
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Shuffle T7-B 大肠杆菌表达感受态细胞
  • 品牌:上海富雨
  • 产地:进口/国产
  • 型号:100μl ×10、100μl ×20
  • 货号:BC209-01
  • 价格: ¥240.0/株
  • 发布日期: 2024-04-13
  • 更新日期: 2024-11-12
产品详请
产地 进口/国产
保存条件 低温冷藏
品牌 上海富雨
货号 BC209-01
用途 科研
组织来源 见详情
细胞形态 见详情
是否是肿瘤细胞
保质期 见详情
器官来源 见详情
免疫类型 见详情
品系 见详情
生长状态 见详情
物种来源 见详情
包装规格 100μl ×10、100μl ×20
是否进口

Shuffle T7-B  感受态细胞

 

组成

BC209-01

BC209-02

Shuffle T7-B Competent cells

10×100μl

20×100μl

pUC190.1ng/μl

5μl

5μl

 

储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。

Shuffle T7-B 菌株为大肠杆菌 BL21 增强型菌株,为 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型,适用于 T7 启动子启动的 蛋白表达。细胞内组成型表达的二硫键异构酶 DsbC 不仅有利于表达蛋白形成正确的二硫键,并具有分子伴侣 的功能,帮助不含二硫键的蛋白正确折叠。T7 RNA 聚合酶基因整合在细菌染色体上的 lac 操纵子区域,基因 组中无λ前噬菌体序列,具有抗 T1 噬菌体感染特点。Shuffle T7-B 感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19 质粒 检测转化效率大于 106 cfu/μg。

fhuA2lacZ::T7gene1[lon]ompTahpCgalλatt::pNEB3-r1-cDsbC(SpecRlacIq)ΔtrxBsulA11R(mcr- 73::miniTn10-TetS) 2 [dcm] R(zgb-210::Tn10 --TetS) endA1 Δgor ?(mcrC-mrr)114::IS10

菌株抗性:对氨苄青霉素,氯霉素,卡那霉素和四环素敏感,对链霉素和壮观霉素有抗性。

1.  将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入质粒 DNA 到细胞中,用手指拨打管底,轻轻

混匀;

2.  冰水浴中放置 30 分钟,不要晃动;

3. 42℃热击 60 秒钟,不要晃动;

4.  冰水浴中放置 2 分钟,不要晃动;

5.  加入 500μl 的室温的 SOC  LB 养基;

6.  置于 30℃摇床中,150-200rpm,复苏培养 60 分钟;

7.   50- 100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 板上。待液体吸干后,倒置平板 30℃培养 12-24 小时。

(平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm 离心 30 秒钟,弃掉上清,留 100μl 左右的液体,用 200μl 吸 头轻轻吹打散菌块,取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液 体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落)

质粒快速转化步骤:将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟,对于氨苄青霉素抗性的质粒,步骤 4 完成后,可直接涂

布或划线于含抗生素的平板上。其它抗性的质粒仍需 40-60 分钟的复苏培养。)

1.  挑取单菌落,接种到含 5ml 带抗生素的 LB 培养基中;

2. 30 , 200rpm 震荡培养细菌至对数生长期(OD600=0.4-0.8);

3.  加入 IPTG 到终浓度为 0.4mM ,30℃诱导 4 小时或 16℃诱导过夜;

4.  诱导完成后,离心收集菌体,用合适的方法(如考马斯亮蓝染胶法,Western-Blot法或酶活性分析法) 分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分,明确表达产物的表达状况(可溶性或不溶性表达);

5.  重组蛋白大量表达时,可用 10ml 过夜培养物转接到 1L 培养基中,当培养到 OD600=0.4-0.8 时,加入终 浓度为 0.4mM 的 IPTG ,30℃诱导 4 小时或 16℃诱导过夜(不同蛋白表达的 条件有所不同,需在

实验中优化)。