产地 | 进口/国产 |
保存条件 | 低温冷藏 |
品牌 | 上海富雨 |
货号 | BC101-01 |
用途 | 科研 |
组织来源 | 见详情 |
细胞形态 | 见详情 |
是否是肿瘤细胞 | |
保质期 | 见详情 |
器官来源 | 见详情 |
免疫类型 | 见详情 |
品系 | 见详情 |
生长状态 | 见详情 |
物种来源 | 见详情 |
包装规格 | 100μl ×10、100μl ×20 |
是否进口 | 是 |
TOP10 感受态细胞
组成 |
BC101-01 |
BC101-02 |
TOP10 Competent cells |
10×100μl |
20×100μl |
pUC19(0.1ng/μl) |
5μl |
5μl |
储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。
本公司生产的TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于 DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108 cfu/μg ,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每 支感受态可以酌情分装使用,降低了实验的成本。质量稳定,使用方便,质优价廉。
F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1araΔ139Δ(ara-leu) 7697galUgalKrpsL(strR)endA1nupG
一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型株。其φ80lacZΔM15 基因的产物可与 pUC 载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。
抗生素耐药性:细胞具有链霉素抗性。
操作步骤(以下操作均按无菌条件的标准进行):
提示
u 感受态细胞应保存在-70℃ , 不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
u 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
u 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到 。
1. 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。 (一次转化感受态细胞的建议用量为 50- 100μl ,可以根据实际情况分装使用。应注意所用 DNA 体积 不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。) 以下实验以 100μl 感受态细胞为例。
2. 向感受态细胞悬液中加入目的 DNA ,轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置 30 分钟。
3. 将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒钟,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却 2 分钟,该过程不要 摇动离心管。(此步骤也可将离心管置于室温进行,时间不需十分准确,夏季或室温较高时,可放置
5-8 分钟左右;如果室温较低,可延长时间至 8- 15 分钟左右。条件允许建议使用 42℃热激方法。)
4. 向每个离心管中加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于 37℃ , 150rpm ,摇 床振荡培养 60 分钟, 目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5. 无菌条件下,取适量菌液加到含相应抗生素的 LB 固体培养基平板上,用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将 细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后,倒置平板,37℃培养 12- 16 小时。(涂布用量可根据具 体实验来调整。转化质粒在 10ng 左右,90mm 平皿涂布 100μl ,55mm 平皿涂布 50μl;连接产物的转 化菌液建议离心后倒掉大部分上清,余 200μl ,取 100μl 用于涂布。)
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中,视平板上菌落生长情况决定去留。
(质粒快速转化步骤:将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟,对于氨苄青霉素抗性的质粒,步骤 3 完成后,可直
接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。)
相关试剂及培养基的制备方法:
1. LB 液体培养基:称取 10g Tryptone ,5gYeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 烧杯中。加入约 800ml 的去 离子水,完全溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0。加去离子水定容至 1L。分装后,121℃ 高压灭菌 20 分钟。
2. SOB 和 SOC 培养基:称取 20g Tryptone,5gYeast Extract,0.5g NaCl 置于 1L 烧杯中加入约 800ml 的去 离子水,完全溶解后再补加 10ml 250mM KCl 溶液,滴加 5M NaOH(约 0.2ml)调 pH 至 7.0 。加入去 离子水将培养基定容至 1L 。121℃灭菌 20 分钟。使用时加入 5ml 灭菌的 2M MgCl2 溶液(此种培养基 称为 SOB)。再补加经 0.22μm 过滤除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml(此种培养基为 SOC)。
3. 转化复苏细菌用的液体 LB 培养基或 SOC 培养基:可以一次高压 50ml 液体培养基,无菌状态按 1ml 每管分装于高压灭菌的 1.5ml 离心管中,装于自封袋中,冻存于-20℃中,每次用一支。可以极大地避 免培养基污染和减少劳动量。
4. LB 固体选择培养基:100ml LB 液体培养基中加入 1.5g 琼脂粉,摇匀后,121℃高压灭菌 20 分钟。冷 却至 50℃左右时加入相应浓度的抗生素(如 AMP 浓度通常为 100μg/ml),混匀后倒在细菌用的无菌培 养皿中,等琼脂凝固后即可使用。
5. IPTG:称量 1.9g IPTG(MW=238.31)充分溶解于 40ml 灭菌水,浓度为 200mmol/L 。用无菌 0.22μm 过滤膜过滤除菌。小份分装后,-20℃保存。
6. X-gal:用 DMF(二甲基甲酰胺)配制成 20mg/ml ,小份分装(1ml/份)后,-20℃避光保存。