JM109  感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融.

      本公司生产的 JM109 感受态细胞是采用大肠杆菌 JM109 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于 DNA 的化学转化。使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 108 cfu/μg ，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。 每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。

基因型：endA1recA1gyrA96thihsdR17(rk-mk+)relA1supE44D(lac-proAB)[F’traD36proABlacIqZΔM15]

JM109 菌株来源于 E.coli K12 菌株，是提取高质量质粒 DNA 的理想菌株。缺失核酸内切酶 (endA1) ，提 高了质粒 DNA 的产量和质量；重组酶缺陷型(recA1)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入 DNA 的稳定 性。hsdR17 突变导致 EcoK 核酸内切酶系统缺失，使得异源 DNA 不被内源核酸酶系统降解。lacIqZΔM15 的存 在使 JM109 可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验。

操作步骤（以下操作均按无菌条件的标准进行）：

提示

u 感受态细胞应保存在-70℃ , 不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。

u 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

u 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到 。

1.  取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。 （一次转化感受态细胞的建议用量为 50- 100μl ，可以根据实际情况分装使用。应注意所用 DNA 体积 不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。) 以下实验以 100μl 感受态细胞为例。

2.  向感受态细胞悬液中加入目的 DNA ，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。

3.  将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒钟，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2 分钟，该过程不要 摇动离心管。（此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置

5-8 分钟左右；如果室温较低，可延长时间至 8- 15 分钟左右。条件允许建议使用 42℃热激方法。）

床振荡培养 60 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5.  无菌条件下， 取适量菌液加到含相应抗生素的 LB 固体培养基平板上， 用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将 细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板， 37℃培养 12-16 小时。（涂布用量可根据具  体实验来调整。转化质粒在 10ng 左右， 90mm 平皿涂布 100μl，55mm 平皿涂布 50μl；连接产物的转

化菌液建议离心后倒掉大部分上清，余 200μl，取 100μl 用于涂布。）

6.  保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。

相关试剂及培养基的制备方法：

1.  LB 液体培养基：称取 10g Tryptone ，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 烧杯中。加入约 800ml 的去离子水， 完全溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0。加去离子水定容至 1L。分装后， 121℃高压灭菌 20 分钟。

2.  SOB 和 SOC 培养基： 称取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 烧杯中加入约 800ml 的 去离子水，完全溶解后再补加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（约 0.2ml）调 pH 至 7.0。加 入去离子水将培养基定容至 1L 。121℃灭菌 20 分钟。使用时加入 5ml 灭菌的 2M MgCl2 溶液（此种培养基称为 SOB）。再补加经 0.22μm 过滤除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此种培养基为 SOC）。

3.  转化复苏细菌用的液体 LB 培养基或 SOC 培养基：可以一次高压 50ml 液体培养基，无菌状态按 1ml 每管分装于高压灭菌的 1.5ml 离心管中，装于自封袋中，冻存于-20℃中，每次用一支。可以极大地避免培养基污染和减少劳动量。

4.  LB 固体选择培养基： 100ml LB 液体培养基中加入 1.5g 琼脂粉，摇匀后，  121℃高压灭菌 20 分钟。

冷却至 50℃左右时加入相应浓度的抗生素（如 AMP 浓度通常为 100μg/ml），混匀后倒在细菌用的无菌培养皿中，等琼脂凝固后即可使用。

5.  IPTG：称量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 灭菌水，浓度为 200mmol/L。用无菌

0.22μm过滤膜过滤除菌。小份分装后， -20℃保存。

6.  X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分装（1ml/份）后， -20℃避光保存。