DH5α-T1感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

DH5α-T1为常规DH5α改进型菌株。缺失核酸酶（endA1）基因，提高质粒的产量和质量；重组酶缺陷型（recA1）减少插入片 段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性。由于lacZΔM15的存在以及lacIq基因的缺失，故不需要加IPTG ，只需要添加X-gal   就可以进行基于α互补原理上的蓝白斑筛选实验。DH5α-T1在基因组tonA区域的突变使菌株获得抵抗T1和T5噬菌体感染的能力。

DH5α-T1感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg DNA。

基因型：F- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 thi- 1 gyrA96 relA1 tonA 菌株抗性：对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、博莱霉素、庆大霉素、氯霉素和四环素敏感。

质粒转化步骤：（以氨苄青霉素抗性的 pUC19 质粒为例）

1.  将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μl 含有 1- 100ng 的质粒 DNA 到细胞中，用手指拨打管底，轻 轻混匀。

2.  冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。

3.  42℃热击 60 秒钟，不要晃动。

4.  冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。

5.  加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。

6.  置于 37℃摇床中，150-200rpm ，复苏培养 60 分钟。

7.  取 50- 100μl 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养 12-24 小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块， 取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的 单克隆菌落。）

1.  化冻的感受态细胞不能长时间放置，影响转化效率；

2.  感受态细胞避免反复冻融；

3.  操作过程要轻柔，避免用移液枪反复吹打；

4.  整个转化过程应注意无菌操作，避免污染。

SOC 培养基：SOB+20mM 葡萄糖