HT115(DE3)感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

HT115(DE3)是 RNase III 缺陷型大肠杆菌菌株，可以用 IPTG 诱导方法表达生产 dsRNA。用于 RNAi 干扰试验。该菌株又具备λ噬菌体 DE3 区，可以表达 T7 RNA 聚合酶，适用于含有 T7 启动子的原核表达载体（如pET 等）的高效表达。非 T7 启动子的表达载体（如pGEX， pMal，pTrc等载体）也可以在该菌株中表达。HT115(DE3)感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19 质粒检测转化效率达 1× 106 cfu/μg DNA。

基因型 ：F- mcrA mcrB, IN(rrnD-rrnE) 1 rnc14::Tn10λ(DE3 lavUV5::T7 polymerase)

菌株抗性 ：对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、氯霉素和链霉素敏感。具有四环素抗性。

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入目的质粒到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀；

2. 冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动；

3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动；

4. 冰水浴中放置 2  分钟，不要晃动；

5. 加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基；

6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟；

7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl  左右的液体，用 200μl  吸头轻轻吹打散菌块，取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的 液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。） （质粒快速转化步骤：对于氨苄青霉素抗性的质粒，将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟，步骤 4  完成后，可直接涂布或划线于含氨苄青霉素 抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。）