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| 产地 | 进口/国产 |
| 保存条件 | 低温冷藏 |
| 品牌 | 上海富雨 |
| 货号 | BC113-01 |
| 用途 | 科研 |
| 组织来源 | 见详情 |
| 细胞形态 | 见详情 |
| 是否是肿瘤细胞 | |
| 保质期 | 见详情 |
| 器官来源 | 见详情 |
| 免疫类型 | 见详情 |
| 品系 | 见详情 |
| 生长状态 | 见详情 |
| 物种来源 | 见详情 |
| 包装规格 | 100μl ×20 |
| 是否进口 | 是 |
NEB 10-beta 感受态细胞
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组成 |
BC113-01 |
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NEB 10-beta Competent cells |
20×100μl |
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pUC19（0.1ng/μl） |
5μl |
储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。
本公司生产的NEB 10-beta感受态细胞是采用大肠杆菌NEB 10-beta菌株经特殊工艺处理得到的感受态细 胞， 可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测， 转化效率可达108 cfu/μg，-70℃保存6个月转化效率不发生 改变。
araD139?(ara-leu)7697fhuAlacX74galK(f80?(lacZ)M15)mcrAgalUrecA1endA1nupGrpsL(StrR)?(mrr-hsdRMS- mcrBC)
1. 大肠杆菌K12菌株背景， DH10B菌株的衍生菌株，核基因中具有链霉素抗性基因(StrR)。 2. 可转化大质粒和BACs。
3. DNA重组缺陷(recA1)和内切酶I缺陷(endA1)的特点有利于DNA克隆的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
4. 对T1噬菌体有抵抗能力（fhuA2）。
5. 无需添加IPTG，只加X-gal即可检测β半乳糖苷酶活性，用于蓝白斑筛选。
操作步骤 （以下操作均按无菌条件的标准进行）：
提示
u 感受态细胞应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
u 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
u 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到 。
1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。 （一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用 DNA 体积 不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。) 以下实验以 100μl 感受态细胞为例。
2. 向感受态细胞悬液中加入目的 DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。
3. 将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒钟， 然后快速将管转移到冰浴中， 使细胞冷却 2 分钟， 该过程不要 摇动离心管。（此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置
5-8 分钟左右；如果室温较低，可延长时间至 8-15 分钟左右。 条件允许建议使用 42℃热激方法。）
4. 向每个离心管中加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素） ，混匀后置于 37℃ 150rpm，摇床
振荡培养 60 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5. 无菌条件下， 取适量菌液加到含相应抗生素的 LB 固体培养基平板上， 用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将 细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板， 37℃培养 12-16 小时。（涂布用量可根据具 体实验来调整。转化质粒在 10ng 左右， 90mm 平皿涂布 100μl ，55mm 平皿涂布 50μl；连接产物的转
化菌液建议离心后倒掉大部分上清，余 200μl，取 100μl 用于涂布。）
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。
相关试剂及培养基的制备方法
：
1. LB 液体培养基：称取 10g Tryptone ，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 烧杯中。加入约 800ml 的
去离子水， 完全溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0。加去离子水定容至 1L。分装
后， 121℃高压灭菌 20 分钟。
2. SOB 和 SOC 培养基： 称取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 烧杯中加入约 800ml 的
去离子水，完全溶解后再补加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（约 0.2ml）调 pH 至 7.0。
加入去离子水将培养基定容至 1L 。121℃灭菌 20 分钟。使用时加入 5ml 灭菌的 2M MgCl2 溶液（此 种培养基称为 SOB）。再补加经 0.22μm 过滤除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此种培养基为 SOC）。
3. 转化复苏细菌用的液体 LB 培养基或 SOC 培养基：可以一次高压 50ml 液体培养基，无菌状态按
1ml每管分装于高压灭菌的 1.5ml 离心管中，装于自封袋中，冻存于-20℃中，每次用一支。可以极大
地避免培养基污染和减少劳动量。
4. LB 固体选择培养基： 100ml LB 液体培养基中加入 1.5g 琼脂粉，摇匀后， 121℃高压灭菌 20 分钟。
冷却至 50℃左右时加入相应浓度的抗生素（如 AMP 浓度通常为 100μg/ml），混匀后倒在细菌用的无
菌培养皿中，等琼脂凝固后即可使用。
5. IPTG：称量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 灭菌水，浓度为 200mmol/L。用无菌
0.22μm过滤膜过滤除菌。小份分装后， -20℃保存。
6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分装（1ml/份）后， -20℃避光保存。
