Stbl4  感受态细胞

储存条件： -70℃保存，避免反复冻融。

       Stbl4 菌株来源于 Stbl2 菌株（Stbl2 为 JM109 衍生菌株），用于克隆不稳定序列（如重复序列， 逆转录病毒

序列等）和甲基化的 DNA 序列，特别适合构建重组逆转录病毒或慢病毒质粒。可用于大质粒的构建和扩增，

适用于构建和扩增质粒 cDNA 文库。区别于 Stbl2 菌株， Stbl4 菌株在 IPTG 和 X-gal 存在的条件下， 可进行α互 补原理的蓝白斑筛选实验。感受态细胞经特殊工艺制作， pUC19 质粒检测转化效率大于 108 cfu/μg。

mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1endA1gyrA96gal-thi-1supE44 λ- relA1 Δ(lac-proAB)/F′ proAB+ lacIqZΔM15 Tn10 (TetR)

菌株抗性： 对氨苄青霉素，卡那霉素，壮观霉素敏感，对四环素有抗性。

1.  将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后， 加入质粒 DNA 或 5-10μl 连接产物到细胞中， 用手

指拨打管底，轻轻混匀；

2.  冰水浴中放置 15-30 分钟，不要晃动；

3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动；

4.  冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动；

5.  加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基；

6.  置于 37℃摇床中， 150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟；

7.  取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板， 37℃培养 12-16 小时。

（当克隆不稳定片段时， 为了降低重组错误率， 复苏培养和涂布培养 采用 30℃的培养条件，平板在 30℃

培养时需要 24 小时左右。）

（平板划线分离法： 复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清， 留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸 头轻轻吹打散菌块，取 10μl 重悬的菌液分多点滴在抗性 LB 平板上， 倾斜吸头， 用吸头头部的侧面将滴在平

板上的液体来回划线。 37℃培养过夜。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）