Stbl3 感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

本公司生产的Stbl3感受态细胞是衍生自大肠杆菌HB101菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞。特别适 用于克隆不稳定载体片段，如含有同向重复序列的慢病毒DNA和其他反转录病毒载体。使用pUC19质粒检测， 转化效率可达108 cfu/μg DNA，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了 实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。

基因型：F-mcrBmrrhsdS20(rB-, mB-) recA13supE44ara-14galK2lacY1proA2rpsL20(StrR)xyl-5λ-leu mtl-1

常规质粒制备的宿主菌，慢病毒载体系统推荐使用的菌株，对慢病毒载体等较大的质粒转化的效果好，有 效抑制长片段末端重复区的重组，减低错误重组的可能性。此外，细胞非常稳定，能提高慢病毒载体或其它不

稳定载体的克隆效率。

抗生素耐药性：细胞具有链霉素抗性。

操作步骤（以下操作均按无菌条件的标准进行）：

提示

u 感受态细胞应保存在-70℃ , 不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。

u 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

u 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到 。

1.  取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。 （一次转化感受态细胞的建议用量为 50- 100μl ，可以根据实际情况分装使用。应注意所用 DNA  体积 不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。) 以下实验以 100μl 感受态细胞为例。

2.  向感受态细胞悬液中加入目的 DNA ，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。

3.  将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒钟，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2 分钟，该过程不要 摇动离心管。（此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置

5-8 分钟左右；如果室温较低，可延长时间至 8- 15 分钟左右。条件允许建议使用 42℃热激方法。）