Stable  感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

本公司生产的Stable感受态细胞是采用Stable菌株经特殊工艺制备得到的感受态细胞。Stable菌株特别适用 于具有末端重复序列的逆转录病毒或慢病毒质粒的构建和扩增，也适用于重复DNA序列的克隆和扩增。Stable 具有与Stbl3和Stbl4完全不同的基因型，比Stbl3和Stbl4生长速度更快，性能更好。核酸内切酶(endA1)基因的缺 失有利于提高质粒DNA的产量和质量。ΔlacZM15基因的存在可用于蓝白斑筛选。菌株还具有抗T1噬菌体感染 的特点。Stable感受态细胞经pUC19质粒检测转化效率大于108 cfu/μg。

基因型:

F ′ proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)/Δ(ara-leu) 7697 araD139fhuA ΔlacX74 galK16 galE15e14- ?80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)

菌株抗性：对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素和呋喃妥因敏感。具有四环素和链霉素抗性。

质粒转化步骤

1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μl 含有 1- 100ng 的质粒 DNA 或 5- 10μl 连接 产物到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。

2.冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。

3.42℃热击 60 秒钟，不要晃动。

4.冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。

5.加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。

6.置于 37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟。

7.取 50- 100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养 12- 18 小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm离心30秒钟，弃掉上清，留100μl左右的液体，用200μl吸头轻 轻吹打散菌块，取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来  回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化，连接产物转化 用涂布法。）

（质粒快速转化步骤：对于氨苄青霉素抗性的质粒，将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟，步骤 4 完成后，可直接涂

布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。）