BJ5183-AD-1  电转感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

BJ5183-AD-1电转感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。该菌株携带的pAd Easy-1质粒包含了 大部分人腺病毒5型的基因组序列（E1/E3基因缺失），表达可供pAd Easy-1骨架质粒和pAd Easy穿梭质粒进行同源 重组的所有组分，产生重组腺病毒质粒。pAdEasy-1为33.5kb ，具有氨苄青霉素抗性，一旦与穿梭载体重组，其 抗性消失。卡那霉素抗性的pAdTrack-CMV质粒检测感受态细胞的转化效率大于105 cfu/μg。

基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioThsdR (StrR ) [pAdEasy-1 (AmpR )]

菌株抗性：对卡那霉素敏感，有链霉素和氨苄青霉素抗性。

1.  电极间距为 0.1cm 的电转杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation cuvettes）插入碎冰中，压实冰 面，冰中静置 5 分钟，使电转杯充分降温。（电转杯重复使用方法：每次用完后，用大量的自来水冲 洗干净去掉菌液和 DNA ，用蒸馏水洗 3 遍，将其泡在 75%乙醇中 30 分钟，取出杯子，沥干液体，放  在超净台中，使乙醇充分挥发，盖上盖子放干燥地方备用）。

2.  取-70℃保存的感受态细胞插入冰中，待细胞刚化冻后，加入质粒 DNA（洗脱或溶解质粒的溶液中离子 不能太高，或用双蒸水稀释），用手指拨打管底轻轻混匀，立即插入冰中，在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA 混合物快速转移到电击杯中，避免产生气泡，确保细胞沉到杯底，盖上杯盖，空管保留待用。

3.  启动电转仪，设置电击参数：2.4 kV ，200Ω , 25 μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser ）。用纸巾擦

掉电转杯外部的水分，将电转杯放入电转槽中进行电击。完成后，将电转杯插入冰中，加入950μl无抗 生素的SOC或LB培养基，并将液体转移到原来保留的感受态空管中，37℃ , 150-250rpm振荡培养1小时。

4.  取 100-200μl 左右的菌液或稀释后的菌液，涂布于含相应抗生素的 LB 平板上，倒置放于 37℃培养箱培 养 12-18 小时。