BJ5183  电转感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

BJ5183电转感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。BJ5183为重组腺病毒质粒构建专用菌株， 能够表达供pAdEasy骨架质粒和pAdEasy穿梭质粒进行同源重组的所有组分。pUC19质粒检测感受态细胞的转 化效率大于109 cfu/μg。

基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioThsdR (StrR )

菌株抗性：对氨苄青霉素，卡那霉素敏感，有链霉素抗性。

1.  电极间距为 0. 1cm 的电转杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation cuvettes）插入碎冰中，压实冰 面，冰中静置 5 分钟，使电转杯充分降温。（电转杯重复使用方法：每次用完后，用大量的自来水冲 洗干净去掉菌液和 DNA ，用蒸馏水洗 3 遍，将其泡在 75%乙醇中 30 分钟，取出杯子，沥干液体，放 在超净台中，使乙醇充分挥发，盖上盖子放干燥地方备用。）

2.  取-70℃保存的感受态细胞插入冰中，待细胞刚化冻后，加入质粒 DNA 或连接产物（洗脱或溶解质粒 的溶液中离子不能太高，或用双蒸水稀释，对照 pUC19 可以用无菌水稀释到 10pg/μl），用手指拨打管 底轻轻混匀，立即插入冰中，在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA 混合物快速转移到电击杯中，避免产 生气泡，确保细胞沉到杯底，盖上杯盖，空管保留待用。

3.  启动电转仪，设置电击参数：2.4 kV ，200Ω , 25 μF（BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）。用纸巾擦 掉电转杯外部的水分，将电转杯放入电转槽中进行电击。完成后，将电转杯插入冰中，加入950μl无抗 生素的SOC或LB培养基，并将液体转移到原来保留的感受态空管中，37℃ , 150-250rpm振荡培养1小时。

4.  取 100-200μl 左右的菌液或稀释后的菌液，涂布于含相应抗生素的 LB 平板上，倒置放于 37℃培养箱培 养 12- 18 小时。